活细胞荧光示踪探针(FDA)

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LA10760

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活细胞荧光示踪探针(FDA)

英文名称：

Fluorescein diacetate

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荧光素二乙酸酯(Fluorescein diacetate,FDA)是一种细胞渗透性的酯酶底物。可作为人谷胱甘肽硫转移酶Pi (hGSTP1-1)的荧光底物。

CAS号	596-09-8
分子式	C24H16O7
外观	白色至微黄色粉末
熔点	200～203℃(lit.)
溶解性	DMSO:≥ 48mg/mL；丙酮:25mg/mL
纯度	＞97%(HPLC)
吸光度	Ex/Em=494nm/521nm
敏感性	对空气敏感

产品描述

荧光素二乙酸酯是一种可渗透的酯酶-基质。荧光素二乙酸酯可作为hGSTP1-1的荧光基质。

体外研究

荧光素(FDA)是绿色荧光染料荧光素的一种乙酰化衍生物。荧光素(FDA)是一种荧光探针，用于重要的染色，是一种荧光活性物质，在不同的细胞质GSTs中有选择性地激活了人类pi类谷胱甘肽S-transferase (hGSTP1)的酯酶活性。在MCF7细胞外源性过表达hGSTP1的MCF7细胞中，观察到荧光素对GST抑制剂的荧光激活，但在表达hGSTA1或hGSTM1的细胞中不存在。荧光素二乙酸酯可作为hGSTP1-1的荧光基质。为了研究荧光激活是由于hGSTP1活性，荧光素二乙酸在体外培养重组hGSTP1-1和GSH。在hGSTP1-1和GSH的存在中观察到显著的荧光激活，而在没有它们的情况下或当酶处于热失活状态时，只观察到轻微的激活。这说明荧光素二乙酸的荧光激活依赖于hGSTP1-1活性。从增长率之间的线性关系在荧光和hGSTP1-1浓度，酶的特定活动1μM荧光素二醋酸盐决心79nmol/15分钟/毫克的蛋白质。荧光素二乙酸盐可作为一种荧光基板，用于测定GSTP1-1的体外抑制剂。作为底物的荧光素二乙酸乙酯和NBDHEX都以浓度依赖性的方式抑制hgstp1 -1依赖的荧光增加，ic50分别为3.3 0.5M和0.61 0.04M。

科研试剂，广泛应用于分子生物学，药理学等科研方面，严禁用于人体。FDA是一种非荧光性疏水性荧光素衍生物，它可以穿透细胞膜进入细胞，通过细胞内酯酶催化水解二乙酸酯基团产生具有高强度的荧光产物荧光素。荧光分子在具有完整细胞膜的细胞内积累，因此这种绿色荧光可以作为一种细胞活力的标签。不具有完整细胞膜或者新陈代谢活性的细胞，不能在细胞内积累荧光产物，因此不能显现绿色荧光。FDA可以与染料PI联合使用，无活性的死细胞被PI着色，发出红色荧光；有活性的细胞PI无法着色，在FDA作用下，紧发出绿色荧光。这两种颜色可以很好的辨别死细胞与活细胞，与单一颜色检测相比，它提供了一种更为准确的活细胞定量检测方法。

储液配置

	1mg	5mg	10mg
1mM	2.4017mL	12.0083mL	24.0165mL
5mM	0.4803mL	2.4017mL	4.8033mL
10mM	0.2402mL	1.2008mL	2.4017mL

细胞实验	MCF7细胞(2～3×10⁵)播种在35毫米玻璃底部盘前的实验。在成像之前，用1mL PBS冲洗细胞，然后用1mL的Hanks的平衡盐溶液孵育(HBSS(+)不含苯酚红)，其中含有1M荧光素(0.1% DMSO as a co溶剂)，在37℃中5分钟。用1mL PBS洗两次细胞，在成像前加1mL HBSS。荧光素和DsRed-express2荧光图像在FITC通道(473nm)和DsRed通道(激发559nm)中获得。得到的16位图像进行了分析。

以下方法仅供参考。

准备2～10mM DMSO储备溶液
将4.2mg溶于1mL DMSO中以制备10mM储备溶液(1mg/ml相当于~2.4mM)
注意：应立即使用原液;应将任何剩余的溶液等分并在<-20℃冷冻。避免反复冻融循环，避免光照。
准备染料工作溶液
在使用之前，通过用Hanks和20mM Hepes缓冲液(HHBS)或您选择的缓冲液(pH7.0)稀释步骤1中的DMSO储备溶液，准备1至20μM染料工作溶液。通过涡旋混合均匀。
用流式细胞仪或荧光显微镜分析细胞：
- 用测试化合物细胞培养一段所需的时间。
- 离心细胞，每管2～10×10⁵个细胞。
- 在500μL染料工作溶液中重悬细胞(来自步骤2)。
- 在室温或37℃下用染料溶液孵育细胞15至30分钟，避光。
- 从细胞中取出染料工作溶液，用HHBS或您选择的缓冲液清洗细胞。将细胞重悬于500μL预热的HHBS或培养基中，得到每管2～10×10⁵个细胞。
- 用流式细胞仪(FL1通道)或荧光显微镜观察Ex/Em=490/520nm处的荧光变化。
  注意：对于细菌细胞染色：当通过测试细菌过夜生长预处理的营养肉汤中1:800稀释储备溶液时，染色是最有效的，但也可以使用新鲜营养肉汤或PBS。细菌悬浮液应用PBS稀释至每毫升10⁵～10⁷个生物。可以通过将1mL溶液施加到.45μm过滤器(25mm)并真空过滤除去溶液，然后加入1mL染料溶液并在室温下孵育5～10分钟来染色细菌。

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